分会

第五分会：生物分析化学

摘要

MicroRNAs (miRNAs) 是一类小非编码RNA,对于基因表达中转录后调节起到关键作用，以其为生物标志物的癌症和病毒感染治疗已取得显著成果。然而，由于疾病相关的miRNA调控机制复杂，现有用于miRNA检测成像的方法信噪比低，通用性差，成像通道单一，因此开发具有高灵敏度和优异选择性的miRNA正交双色成像方法对于进一步理解活细胞内miRNA功能具有重要价值。在这里，我们以点亮型RNA适配体作为成像标签，从适配体筛选源头设计miRNA传感器。我们以Pepper适配体的促稳发夹结构作为开关引入miRNA互补序列成功构建了传感模块，传感模块无需复杂的优化，信噪比到达70倍，可以实现对多目标物（miR-21与miR-122）的高灵敏检测,检测线为0.48和0.2 nM，而且传感模块可以通过多步串列进一步放大检测信噪比。由于传感模块设计原理具有普适性，我们进一步构建了Squash-miRNA响应元件。随后我们选取红光通道的Pepper-HBC620与绿光通道的Squash-DFHBI-1T成像标签构建为正交双色miRNA成像平台，并成功实现了不同miRNA的区分，既，当存在miR-21时，Squash-DFHBI-1T恢复结构，呈现绿色荧光，当存在miR-122时，Pepper-HBC 620红色荧光被点亮。结果表明我们的miRNA正交双色成像平台有望作为研究活细胞内RNA复杂功能的有利工具。

关键词

MicroRNA;正交成像;点亮型荧光RNA

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