分会

第五分会：生物分析化学

摘要

细胞膜蛋白是结合或整合在细胞膜结构上，直接介导细胞与周围环境通讯并参与调节细胞功能的蛋白总和。在肿瘤研究中，膜蛋白经常作为肿瘤检测标志物和药物胞内递送的关键介导分子，具有重要的价值。然而，因其组成结构复杂、作用机制多样，并且通常与细胞膜及细胞膜上的其他分子具有高度复杂的相互作用，因此具有极高的研究难度。 本实验室前期通过整合人工碱基的核酸适体细胞筛选AEGIS-Cell-SELEX技术，获得了包含人工碱基的能够特异识别肝癌细胞的核酸适体LZH8和LZH5B [1]。其中，LZH8被发现能够特异性识别肝癌细胞来源的外泌体，在过去几年中被广泛用于各种肿瘤外泌体检测方法的研究中[2-4]。而LZH5B被发现可以通过分子识别介导纳米药物递送载体进入细胞发挥功能[5]。两种核酸适体均被认为在肿瘤检测和治疗领域具有重要的应用潜力。然而，一直以来含人工碱基的核酸适体LZH8和LZH5B分子识别的蛋白靶点并不明确，导致进一步的肿瘤相关标志物确证和机制研究无法开展。 本研究利用Biotin修饰的核酸适体LZH8和LZH5B分别进行了靶蛋白Pull-down实验。在核酸适体LZH8的靶蛋白Pull-down实验中，我们在75kDa左右发现了LZH8特异性条带，并用蛋白质谱进行了鉴定。随后利用基因过表达实验，以及蛋白与核酸分子相互作用实验（如，生物膜干涉BLI）、流式细胞实验等初步验证了LZH8的靶蛋白为热休克蛋白家族的糖调节蛋白GRP78。在核酸适体LZH5B的靶蛋白Pull-down实验中，我们在85kDa以及70kDa左右发现了两条LZH5B特异性条带，并用蛋白质谱进行了鉴定。随后利用siRNA实验，Pull-down之后的Western blotting实验，以及蛋白与核酸分子相互作用实验（如，BLI）等验证了LZH5B的靶蛋白为XRCC5（82kDa）。70kDa左右的特异性条带为XRCC5的异质二聚体XRCC6。 后期实验中，本研究将利用LZH8能够特异性结合肿瘤外泌体的特点，以及肿瘤外泌体参与肿瘤发生发展，可作为肿瘤液体活检重要靶标的优势，利用LZH8进行临床样本的检测，以进行癌症非创伤性诊断。本研究将利用LZH5B在药物递送[5]方面的优势，进行核酸适体LZH5B的药物递送机制与靶蛋白XRCC5相关的内容。

关键词

人工碱基;核酸适体;靶点确证;生物标志物;药物递送

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