分会

第七分会：生物标记与分析

摘要

原核生物Agonaute（pAgo）蛋白是一类由核酸介导的可编程性核酸内切酶，通常以短的单链DNA（ssDNA）为引导链（gDNA），靶向识别并剪切DNA[1-3]。pAgo具有单碱基分辨力的精准特异性、结合核酸活性、多周转高效剪切活性、灵活的靶向设计等众多显著优势，为核酸分析技术的发展提供了契机[4]。本研究以肿瘤miRNA为检测对象，以核酸扩增技术为基础，以pAgo为核酸检测工具，利用TtAgo可编程性剪切功能，发展了双重信号放大、多重检测策略。本研究提出了基于可编程性TtAgo的肿瘤多重miRNA检测平台（TEAM）。TEAM方法以EXPAR产生的大量扩增子为gDNA，指导TtAgo高效、精准地剪切探针，从而实现双重信号放大检测miRNA。TEAM方法在10-8 M到10-18 M浓度范围内展现出很好的线性关系，双重信号放大策略使其检测限达到1 aM。利用TtAgo的可编程性并设计不同通道的荧光探针，实现了四重miRNA的同步检测和高度同源性的miRNA家族成员的精准分型。进一步评估了该方法的临床应用潜力，有望促进核酸分析技术的发展，推动其在肿瘤临床诊断中的应用。

关键词

原核生物Argonaute;；肿瘤miRNA;多重检测

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