中国化学会第32届学术年会
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无分离均相体系中细胞外囊泡的表征方法
张振 方晓红*

分会

第四十一分会:纳米生物效应与纳米药物化学

摘要

细胞外囊泡是指从细胞膜上脱落或由细胞分泌的双层膜结构的囊泡状小体,广泛存在于各种体液中。分析体液中肿瘤细胞外囊泡所携带的特异性生物标志物,有望成为一种无创的肿瘤诊断与监测方法。由于肿瘤细胞外囊泡在体液中相对数量太少,难以同时兼顾提取效率和纯度,因此对发展能用于临床样品(血浆等)的无分离均相表征方法提出了挑战。 利用核酸适体分子量小、亲和力高并且可以用荧光染料进行标记的优点(适体平均10kDa,抗体一般要超过150kDa),我们开发了一种基于核酸适体的荧光偏振测定技术(AFPExo)用于细胞外囊泡定量检测,该方法可以在的血浆样本中进行细胞外囊泡的表征分析。这是一种无需分离、无需扩增且高灵敏度的方法,可以直接表征少于1μL人血浆中的细胞外囊泡。该测定方法利用了细胞外囊泡的双重性质,即用于荧光偏振放大的大质量或体积以及可被特定低分子量适体识别的表面抗原。因此,染料标记的适体与细胞外囊泡的结合将显著改变适体的分子量,导致荧光偏振信号变化。利用该方法,我们可以在每微升体液中对细胞外囊泡进行表征。由于荧光偏振受环境干扰的影响较小,人体血浆中的细胞外囊泡检测时不需要任何繁琐的样品预处理。我们从肺癌患者和健康供体的临床样本中的细胞外囊泡进行了表征验证。该工作建立了一种无分离均相体系中细胞外囊泡的表征平台,可直接表征生物体液中的细胞外囊泡,促进了无分离体系下的肿瘤诊断和治疗监测。

关键词

细胞外囊泡;荧光偏振;核酸适体;无分离

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